Coupled rolling circle amplification loop-mediated amplification for rapid detection of short DNA sequences
http://www.biotechniques.com/biotechniques/BiotechniquesJournal/2008/September/Coupled-rolling-circle-amplification-loop-mediated-amplification-for-rapid-detection-of-short-DNA-sequences/biotechniques-45312.html?autnID=591508
http://primerexplorer.jp/elamp4.0.0/index.html
Colorimetric detection of loop-mediated isothermal amplification reaction by using hydroxy naphthol blue
http://www.biotechniques.com/biotechniques/BiotechniquesJournal/2009/March/Colorimetric-detection-of-loop-mediated-isothermal-amplification-reaction-by-using-hydroxy-naphthol-blue/biotechniques-118324.html?autnID=598661
Tuesday, July 14, 2009
Coupled rolling circle amplification loop-mediated amplification for rapid detection of short DNA sequences
BioTechniques, Vol. 45, No. 3, September 2008, pp. 275–280
Coupled rolling circle amplification loop-mediated amplification for rapid detection of short DNA sequences
Jennifer Y. Marciniak 1, Andrew C. Kummel 2, Sadik C. Esener 3, Michael J. Heller 1, 3, Bradley T. Messmer 41, Department of Bioengineering, University of California San Diego, La Jolla, CA, USA
2, Department of Chemistry and Biochemistry, University of California San Diego, La Jolla, CA, USA
3, Department of Nanoengineering, University of California San Diego, La Jolla, CA, USA
4, Rebecca and John Moores Cancer Center, University of California San Diego, La Jolla, CA, USA
Circularizable oligonucleotide probes can detect short DNA sequences with single-base resolution at the site of ligation and can be amplified by rolling circle amplification (RCA) using strand displacing polymerases. A secondary amplification scheme was developed that uses the loop-mediated amplification reaction concurrent with RCA to achieve rapid signal development from the starting circular molecules. This isothermal reaction was found to be significantly faster than the comparable hyperbranching amplification method and could detect 100 circular copies in less than 1 h.
Coupled rolling circle amplification loop-mediated amplification for rapid detection of short DNA sequences
Jennifer Y. Marciniak 1, Andrew C. Kummel 2, Sadik C. Esener 3, Michael J. Heller 1, 3, Bradley T. Messmer 41, Department of Bioengineering, University of California San Diego, La Jolla, CA, USA
2, Department of Chemistry and Biochemistry, University of California San Diego, La Jolla, CA, USA
3, Department of Nanoengineering, University of California San Diego, La Jolla, CA, USA
4, Rebecca and John Moores Cancer Center, University of California San Diego, La Jolla, CA, USA
Circularizable oligonucleotide probes can detect short DNA sequences with single-base resolution at the site of ligation and can be amplified by rolling circle amplification (RCA) using strand displacing polymerases. A secondary amplification scheme was developed that uses the loop-mediated amplification reaction concurrent with RCA to achieve rapid signal development from the starting circular molecules. This isothermal reaction was found to be significantly faster than the comparable hyperbranching amplification method and could detect 100 circular copies in less than 1 h.
Cloning improvements
BioTechniques, Vol. 47, No. 1, July 2009, pp. 609–615
Cell-free cloning using multiply-primed rolling circle amplification with modified RNA primers Hirokazu Takahashi 1, Kimiko Yamamoto 2, Toshio Ohtani 1, Shigeru Sugiyama 11, NanoBiotechnology Laboratory, Food Engineering Division, National Food Research Institute, National Agriculture and Food Research Organization, Ibaraki, Japan
2, Insect Genome Laboratory, National Institute of Agrobiological Sciences, Ibaraki, Japan
The predominant method for DNA cloning is by propagation in biological hosts, but this method has limitations because certain sequences are difficult to clone using any combination of available hosts or vectors. Recently, multiply-primed rolling circle amplification (MPRCA) has been applied to overcome the problems of the DNA cloning via host cells. However, when MPRCA is used to amplify from minute quantities of DNA template, the products are mostly by-product DNA molecules generated by false priming and primer dimer formation. This study demonstrates that MPRCA using random RNA primers—instead of DNA primers—blocked the synthesis of by-products and succeeded in amplifying one copy of a circular DNA molecule more than 1012-fold to give microgram quantities of amplification product without using submicroliter reaction volumes. Furthermore, a ligation strategy was elaborated to circularize only the desired DNA sequence and eliminate undesired ligation-products. A combination of these methods was able to amplify and ligate a large construct without undesired DNA sequences and at microgram quantities within one day. Therefore, these methods have the possibility to improve DNA cloning techniques that have been restricted by the limitations of PCR methods or by the host cell.
Cell-free cloning using multiply-primed rolling circle amplification with modified RNA primers Hirokazu Takahashi 1, Kimiko Yamamoto 2, Toshio Ohtani 1, Shigeru Sugiyama 11, NanoBiotechnology Laboratory, Food Engineering Division, National Food Research Institute, National Agriculture and Food Research Organization, Ibaraki, Japan
2, Insect Genome Laboratory, National Institute of Agrobiological Sciences, Ibaraki, Japan
The predominant method for DNA cloning is by propagation in biological hosts, but this method has limitations because certain sequences are difficult to clone using any combination of available hosts or vectors. Recently, multiply-primed rolling circle amplification (MPRCA) has been applied to overcome the problems of the DNA cloning via host cells. However, when MPRCA is used to amplify from minute quantities of DNA template, the products are mostly by-product DNA molecules generated by false priming and primer dimer formation. This study demonstrates that MPRCA using random RNA primers—instead of DNA primers—blocked the synthesis of by-products and succeeded in amplifying one copy of a circular DNA molecule more than 1012-fold to give microgram quantities of amplification product without using submicroliter reaction volumes. Furthermore, a ligation strategy was elaborated to circularize only the desired DNA sequence and eliminate undesired ligation-products. A combination of these methods was able to amplify and ligate a large construct without undesired DNA sequences and at microgram quantities within one day. Therefore, these methods have the possibility to improve DNA cloning techniques that have been restricted by the limitations of PCR methods or by the host cell.
Saturday, July 04, 2009
Más Chistes
Un viejito va al médico a preguntarle si puede tener
hijos con su esposa de setenta. El médico le da un tarrito y le dice que le
traiga al día siguiente una muestra de semen.
Cuando vuelve, el viejito le dice:
- Doctor, no he podido traerle la muestra de semen.
- ¿Lo ha intentado?
- Sí, Doctor. Primero con la mano derecha, después con la izquierda.
Luego lo intentó mi esposa, primero con las dos manos y luego con los
dientes, pero no hubo forma...
¡No pudimos abrir el tarrito....!
MÁS DE VIEJITOS
El viejito se está bañando cuando de pronto siente
que su pene comienza a
endurecerse y llama a su viejita:
- ¡Josefina, Josefina, ven pronto!
La viejita va corriendo al baño y cuando ve este
espectáculo le dice al viejito:
¿Me desnudo, me desnudo? - pregunta con emoción la viejita.
- ¡Déjate de eso y ve rápido a buscar la cámara para tomar una foto!
EN MISA
El padre dice en la misa:
- Sí tienen fe se sanarán, pongan su mano sobre la parte afectada y el
milagro ocurrirá.
Una pareja de viejitos esta oyendo el sermón y el
viejito baja la mano con disimulo y la pone entre sus piernas. La viejita lo
ve y le dice:
- Viejo, el Cura dijo milagro, no resurrección.
¡CUÁNTAS CANAS!
Se desnudan el viejito y la viejita, y dice el
esposo todo sorprendido:
- ¡Ay, mi amor. Como tienes de canas allá abajo!
- No son canas, son telarañas, ¡viejo inútil!
EN TRATAMIENTO
Estaban en una reunión familiar y le dicen a los abuelos:
- Bueno, y ¿cómo va su vida sexual?
A lo cual la viejita contestó:
- Pues estamos en tratamiento.
- ¿Cómo así que en tratamiento?
- Pues sí: el trata y yo miento.
VISITA CONYUGAL
Llega una viejita a la cárcel el día de la visita conyugal y le dice al guardia
- Señor yo vengo a la visita conyugal.
- El guardia asombrado le pregunta: ¿Pero señora,
con quién?
- Con cualquiera, con cualquiera...
LA RANA Y EL VIEJO
Iba un viejito por el bosque cuando escuchó a sus
pies una débil voz.
Se agachó y descubrió que quien le hablaba era una
ranita:
- 'Soy una princesa hermosa, erótica y sensual,
diestra en todos los placeres de la carne y el amor.. La reina mala,
envidiosa de mis encantos, me convirtió en rana, pero si me das un beso,
volveré a ser quien era y te daré todos los goces y deleites que
mi voluptuoso temperamento y mi ardiente concupiscencia pueden producir'.
El viejito levanta la rana y se la echa en el bolsillo.
Asoma la cabeza la ranita y le pregunta muy desconcertada:
-¿Qué? ¿No me vas a besar?
- ¡No! -Respondió el viejecito
- A mi edad es más divertido tener una rana que habla, que una maniática sexual!!!!!!!!!!!!!!!!
hijos con su esposa de setenta. El médico le da un tarrito y le dice que le
traiga al día siguiente una muestra de semen.
Cuando vuelve, el viejito le dice:
- Doctor, no he podido traerle la muestra de semen.
- ¿Lo ha intentado?
- Sí, Doctor. Primero con la mano derecha, después con la izquierda.
Luego lo intentó mi esposa, primero con las dos manos y luego con los
dientes, pero no hubo forma...
¡No pudimos abrir el tarrito....!
MÁS DE VIEJITOS
El viejito se está bañando cuando de pronto siente
que su pene comienza a
endurecerse y llama a su viejita:
- ¡Josefina, Josefina, ven pronto!
La viejita va corriendo al baño y cuando ve este
espectáculo le dice al viejito:
¿Me desnudo, me desnudo? - pregunta con emoción la viejita.
- ¡Déjate de eso y ve rápido a buscar la cámara para tomar una foto!
EN MISA
El padre dice en la misa:
- Sí tienen fe se sanarán, pongan su mano sobre la parte afectada y el
milagro ocurrirá.
Una pareja de viejitos esta oyendo el sermón y el
viejito baja la mano con disimulo y la pone entre sus piernas. La viejita lo
ve y le dice:
- Viejo, el Cura dijo milagro, no resurrección.
¡CUÁNTAS CANAS!
Se desnudan el viejito y la viejita, y dice el
esposo todo sorprendido:
- ¡Ay, mi amor. Como tienes de canas allá abajo!
- No son canas, son telarañas, ¡viejo inútil!
EN TRATAMIENTO
Estaban en una reunión familiar y le dicen a los abuelos:
- Bueno, y ¿cómo va su vida sexual?
A lo cual la viejita contestó:
- Pues estamos en tratamiento.
- ¿Cómo así que en tratamiento?
- Pues sí: el trata y yo miento.
VISITA CONYUGAL
Llega una viejita a la cárcel el día de la visita conyugal y le dice al guardia
- Señor yo vengo a la visita conyugal.
- El guardia asombrado le pregunta: ¿Pero señora,
con quién?
- Con cualquiera, con cualquiera...
LA RANA Y EL VIEJO
Iba un viejito por el bosque cuando escuchó a sus
pies una débil voz.
Se agachó y descubrió que quien le hablaba era una
ranita:
- 'Soy una princesa hermosa, erótica y sensual,
diestra en todos los placeres de la carne y el amor.. La reina mala,
envidiosa de mis encantos, me convirtió en rana, pero si me das un beso,
volveré a ser quien era y te daré todos los goces y deleites que
mi voluptuoso temperamento y mi ardiente concupiscencia pueden producir'.
El viejito levanta la rana y se la echa en el bolsillo.
Asoma la cabeza la ranita y le pregunta muy desconcertada:
-¿Qué? ¿No me vas a besar?
- ¡No! -Respondió el viejecito
- A mi edad es más divertido tener una rana que habla, que una maniática sexual!!!!!!!!!!!!!!!!
Chistes
!! Como para quedarse mudo !!.
Después de 25 años de casados, un día miré a mi esposa y le dije:
Querida, ¿te das cuenta de que hace 25 años yo tenía un apartamento barato, un carro barato, dormía en un sofá-cama barato, veía televisión en un televisor de 10 pulgadas en blanco y negro, pero dormía todas las noches con una despampanante joven de 25 años? Y ahora tengo una hermosa casa, un carro último modelo, una cama grande, un televisor enorme de plasma, amen de otras delicadezas de vida.
Pero ahora..... duermo todas las noches con una mujer de CUARENTA Y TANTOS años con un poquito de sobrepeso.
! Me parece que no estás manejando bien tu parte de la situación, creo necesario, que pongas mas de tu parte !.
Mi esposa, a la que considero una persona muy razonable. Me dijo:
Mi amor, es procedente que salgas y busques una despampanante joven de 25 años, super delgada para que te acuestes con ella y seas mas feliz, que yo por mi parte solo me aseguraré de que... vuelvas a vivir en un apartamento barato, tengas un carro barato y duermas en un sofá-cama barato... ¡ Todos seremos felices !
MORALEJA:
LAS MUJERES SON Y SERÁN SIEMPRE MAS INTELIGENTES QUE BONITAS.
LOS HOMBRES SON Y SERÁN SIEMPRE MAS CALIENTES Y PENDEJOS QUE INTELIGENTES.
!!!!!!!!!!
Después de 25 años de casados, un día miré a mi esposa y le dije:
Querida, ¿te das cuenta de que hace 25 años yo tenía un apartamento barato, un carro barato, dormía en un sofá-cama barato, veía televisión en un televisor de 10 pulgadas en blanco y negro, pero dormía todas las noches con una despampanante joven de 25 años? Y ahora tengo una hermosa casa, un carro último modelo, una cama grande, un televisor enorme de plasma, amen de otras delicadezas de vida.
Pero ahora..... duermo todas las noches con una mujer de CUARENTA Y TANTOS años con un poquito de sobrepeso.
! Me parece que no estás manejando bien tu parte de la situación, creo necesario, que pongas mas de tu parte !.
Mi esposa, a la que considero una persona muy razonable. Me dijo:
Mi amor, es procedente que salgas y busques una despampanante joven de 25 años, super delgada para que te acuestes con ella y seas mas feliz, que yo por mi parte solo me aseguraré de que... vuelvas a vivir en un apartamento barato, tengas un carro barato y duermas en un sofá-cama barato... ¡ Todos seremos felices !
MORALEJA:
LAS MUJERES SON Y SERÁN SIEMPRE MAS INTELIGENTES QUE BONITAS.
LOS HOMBRES SON Y SERÁN SIEMPRE MAS CALIENTES Y PENDEJOS QUE INTELIGENTES.
!!!!!!!!!!
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